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Comment préparer des plasmides de haute qualité?

Temps de mise à jour : 2021-01-12

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Comment préparer des plasmides de haute qualité?
GeneralBiosystems expérience dans l'industrie de vous apprend comment préparer des plasmides de haute qualité.

La préparation de plasmides à partir de cultures bactériennes implique généralement deux étapes: la lyse bactérienne et la purification de l'ADN plasmidique. La lyse alcaline est la méthode la plus couramment utilisée pour la lyse cellulaire pour les préparations à petite échelle. Cependant, il existe de nombreuses méthodes pour les étapes de purification d'ADN plasmidique, et ces méthodes ont leurs propres avantages et inconvénients, qui peuvent affecter l'application de la biologie moléculaire en aval.

Après la lyse et la neutralisation des cellules, une petite quantité d'ADN chromosomique superenroulé de grand volume et de protéines cellulaires dénaturées précipiteront hors de la solution ensemble, tandis que le plasmide est toujours dans la solution, puis le précipité peut être facilement séparé de la solution par centrifugation ou filtration.

La solution d'ADN plasmidique est séparée. Mais à ce moment, l'ADN plasmidique est toujours mélangé avec les protéines et débris cellulaires restants, le sel, l'EDTA et la RNase.


Par conséquent, des étapes de purification ultérieures sont nécessaires pour éliminer d'autres impuretés de l'ADN plasmidique. Il existe trois méthodes de purification couramment utilisées:

Méthode d'extraction phénol-chloroforme

High-quality gene synthesis plasmid preparation process

Le mélange phénol / chloroforme dissoudra les contaminants protéiques et lipidiques, tandis que les acides nucléiques resteront dans la phase aqueuse. Cependant, il peut y avoir des résidus de phénol ou de chloroforme dans l'échantillon final, ce qui inhibera les réactions enzymatiques en aval.

De plus, le chloroforme et le phénol sont nocifs pour l'homme. Par conséquent, cette méthode est rarement utilisée dans la production industrielle.



Précipitation à l'éthanol


La précipitation à l'éthanol est une méthode courante pour dessaler et concentrer l'ADN. L'éthanol peut modifier la structure de l'ADN, de sorte que l'ADN peut être précipité hors de la solution.

Après avoir éliminé les sels solubles et les petites molécules organiques, remettre en suspension l'ADN plasmidique précipité. La méthode de précipitation à l'éthanol est bon marché et efficace, mais elle précipite également des fragments d'ARN et d'ADNsb.



Méthode de séparation sur colonne de purification d'acide nucléique (colonne de rotation)

High-quality plasmid preparation method

L'acide nucléique sera combiné avec de la silice en phase solide dans certaines conditions. Le changement des conditions peut éluer et purifier l'acide nucléique. Cette méthode est généralement utilisée dans les kits de miniprep de plasmide. Cette méthode est pratique et rapide, mais le coût est plus élevé.

La précipitation à l'éthanol et les colonnes de spin sont les méthodes les plus couramment utilisées dans l'industrie de la synthèse de gènes et du clonage. De plus en plus de fournisseurs utilisent la précipitation à l'éthanol en raison de son moindre coût.

GeneralBiosystems dispose d'une technologie de synthèse de gène professionnelle. Si vous rencontrez des problèmes lors de la préparation de plasmides de haute qualité, vous pouvez demander l'aide de Generalbiosystems. Nous avons un personnel de recherche scientifique professionnel pour préparer et assurer une préparation de haute qualité.