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Caractéristiques d'application de diverses étiquettes d'expression et de purification de protéines

Temps de mise à jour : 2020-11-13

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Caractéristiques d'application de diverses étiquettes d'expression et de purification de protéines
Le marqueur protéique fait référence à la protéine ou au polypeptide exprimé par fusion avec la protéine cible pendant la préparation de la protéine recombinante. Les fonctions de la protéine marqueur sont généralement: de favoriser la solubilité et la stabilité de la protéine cible; pour faciliter la détection de la protéine cible; et pour faciliter la purification et l'expression des protéines cibles.

Petite étiquette de protéine de poids moléculaire

Ce type de marqueur est généralement une séquence polypeptidique, et sa fonction principale est de faciliter la purification des protéines et peut également être utilisé pour la détection et l'identification des protéines.

En raison de son faible poids moléculaire, il n'affecte fondamentalement pas la structure de la protéine cible et est généralement exprimé sous forme de fusion avec une protéine de poids moléculaire plus élevé.

Les balises à petites molécules comprennent généralement: 6 * Son tag, Flag tag, c-Myc tag, HA tag, Arg6 tag, AviTag, etc. Les tags les plus couramment utilisés sont 6 * His tag, Flag tag et c-Myc tag.


HIS tag
Application principale: Sa protéine de fusion d'étiquette est également utilisée pour la recherche d'interaction protéine-protéine et protéine-ADN.
Fonctionnalités:
1. Le poids moléculaire du marqueur est petit;
2. Il peut être purifié en présence / conditions de dénaturation d'agents tensioactifs non ioniques. Le premier est utilisé dans la purification de protéines hautement hydrophobes, et le dernier est particulièrement utile dans la purification des protéines du corps d'inclusion;
3. Il peut être appliqué à une variété de systèmes d'expression, avec des conditions de purification douces;
4. Il peut être utilisé avec d'autres étiquettes d'affinité pour construire des étiquettes d'affinité parentales;
5. L'immunogénicité est relativement faible.

Balise de drapeau
Principales applications: largement utilisé dans l'expression, la purification, l'identification des protéines, la recherche fonctionnelle et les interactions protéiques et d'autres domaines connexes, avec une efficacité d'expression plus élevée dans les systèmes d'expression eucaryotes.
Fonctionnalités:
1. Il n'interagit généralement pas avec la protéine cible, ce qui est pratique pour les chercheurs de mener des recherches en aval sur la protéine de fusion.
2. La protéine cible peut être directement soumise à une chromatographie d'affinité par FLAG. Cette chromatographie est une purification non dénaturante, qui peut purifier la protéine de fusion active avec une efficacité de purification élevée.
3. Elle peut être reconnue par des anticorps anti-FLAG, de sorte que la protéine de fusion contenant FLAG peut être détectée et identifiée par Western Blot, ELISA et d'autres méthodes.
4. Le FLAG fusionné à l'extrémité N-terminale peut être excisé par l'entérokinase (DDDK) pour obtenir une protéine cible spécifique.

Etant donné que le marqueur de petit poids moléculaire n'affecte pas la structure de la protéine, il n'a généralement pas besoin d'être retiré, ce qui peut réaliser une production à grande échelle.

Il existe sur le marché des anticorps marqueurs correspondants de petit poids moléculaire, qui peuvent faciliter la détection de l'expression des protéines. Par conséquent, des étiquettes de petit poids moléculaire sont utilisées dans les expériences et la production. Le plus utilisé.


Grande étiquette de poids moléculaire

La fonction principale de la protéine de marqueur de grand poids moléculaire est de favoriser la solubilité de la protéine cible, de favoriser le repliement correct de la protéine et d'améliorer la stabilité, et le marqueur de grand poids moléculaire peut augmenter l'expression de la protéine.

La protéine marqueur macromoléculaire est généralement liée à la protéine cible par des sites de restriction, ce qui est pratique pour l'excision après expression et purification.

En raison du poids moléculaire élevé de l'étiquette, la structure spatiale peut affecter la protéine cible, et elle peut également être utilisée entre la protéine étiquette et la protéine cible.

Ajoutez des peptides de liaison entre les fichiers. Les balises macromoléculaires courantes sont: balise GST, balise Sumo, balise TrxA, balise MBP, etc.


Étiquette GST
Application principale: le système d'expression de fusion GST est largement utilisé dans l'expression de diverses protéines de fusion et peut être exprimé dans des cellules hôtes telles que E. coli et la levure.
Fonctionnalités:
1. C'est une protéine hautement soluble;
2. Il peut être exprimé en grandes quantités dans E. coli, ce qui peut augmenter le niveau d'expression.
3. Dans la plupart des cas, la protéine de fusion est soluble en solution aqueuse et forme des dimères.

Les étiquettes GST peuvent être facilement détectées par analyse enzymatique ou immunoessai. Les marqueurs aident à protéger les protéines recombinantes de la dégradation par les protéases extracellulaires et améliorent leur stabilité.

Dans la plupart des cas, la protéine de fusion GST est complètement ou partiellement soluble.


Balise Sumo
La protéine d'étiquette SUMO est un petit modificateur de type ubiquitine et l'un des membres importants de la superfamille des chaînes polypeptidiques de l'ubiquitine. Il peut être utilisé comme marqueur protéique ou comme site de clivage enzymatique et d'hydrolyse.
Fonctionnalités:
1. Augmenter l'expression de la protéine de fusion
2. Résistant à l'hydrolyse des protéases, favorisant ainsi le repliement correct de la protéine cible
3. Améliorer la solubilité dans l'eau de la feuille de destination
4. Il peut être complètement excisé par l'enzyme protéolytique SUMO pour obtenir une protéine cible sans étiquette

Les étiquettes protéiques jouent un rôle très important dans la production de protéines recombinantes, permettant l'expression et la purification de différentes protéines à réaliser.

Lors de la sélection des balises pendant l'expérience, les balises peuvent être sélectionnées en fonction de l'objectif de l'expérience.

Le service d'expression de protéines des biosystèmes généraux peut être basé sur les expériences des clients. Objectif, personnaliser un plan d'expression de protéine approprié et exprimer rapidement la protéine cible à travers des étiquettes appropriées.