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Processus technologique de sous-clonage —— Generalbiosystems

Temps de mise à jour : 2020-08-14

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Processus technologique de sous-clonage —— Generalbiosystems

Su bcloning technologie se réfère à la re-clonage de fragments d'ADN de gène dans le cas de leur obtention, de manière à analyser ou plus recombiner l'ADN du gène cible. La technologie de sous-clonage est également une technologie de clonage moléculaire.

L'émergence de cette technologie permet aux gens d'avoir une étude plus approfondie des séquences d'ADN des gènes, de clarifier la fonction des gènes et d'analyser le phénotype des organismes du point de vue génétique.


Le processus technique de sous-clonage est principalement divisé en quatre étapes: obtention du fragment cible, connexion du vecteur digéré et du fragment cible, transfert dans les cellules hôtes, identification et criblage.


Méthode d'obtention du fragment cible

Obtenir le fragment de gène cible directement à partir de la bibliothèque de gènes;

En utilisant la technologie PCR, utilisez l'ARNm comme matrice pour transcrire en sens inverse la séquence d'ADNc pour obtenir la bibliothèque d'ADNc pour obtenir le gène cible;

Utilisez des enzymes de restriction pour couper l'ADN du donneur en plusieurs fragments et les introduire dans les cellules. Après criblage, des cellules contenant le gène cible sont obtenues;

Des informations sur la séquence des gènes sont obtenues et une synthèse artificielle est effectuée in vitro.


Ligation du vecteur de digestion de restriction et du fragment cible

Choisissez l'endonucléase de restriction appropriée pour couper la séquence de fragments cibles du vecteur. Dans des circonstances normales, il y aura trois situations: extrémité collante symétrique, extrémité collante asymétrique et extrémité émoussée. Dans les expériences de sous-clonage, la ligature asymétrique des extrémités collantes est préférée, qui peut diriger l'ADN étranger dans le vecteur.


Transfert dans les cellules hôtes

Il existe généralement deux méthodes pour transférer le vecteur lié au gène cible dans les cellules: la transformation / transfection et la transduction.

La transformation / transfection est le transfert de plasmides recombinants ou de bactériophages dans des cellules hôtes traitées; la méthode de transduction consiste à infecter les cellules hôtes avec des virus porteurs d'ADN étranger. En général, la transduction est plus efficace que les méthodes de transformation.


Contrôle d'identification

Le criblage des cellules clonées utilise généralement un criblage direct. Le support possède des marqueurs génétiques identifiables, qui peuvent efficacement distinguer et séparer les molécules recombinantes des cellules d'origine.

Après que certaines molécules porteuses portent des gènes étrangers, la couleur des colonies ou des plaques formées présente des changements évidents, tels que du bleu à incolore, et les changements phénotypiques de couleur évidents peuvent clairement distinguer les molécules recombinantes.

En outre, il existe d'autres méthodes de criblage de médicaments qui peuvent efficacement cribler les cellules clonées à travers des phénomènes phénotypiques.



Generalbiosystems dispose d'une équipe technique expérimentée et d'une plate-forme de synthèse de gènes brevetée, qui peuvent fournir aux clients des services de sous-clonage à guichet unique, notamment la synthèse de gènes cibles, la construction et la transformation de vecteurs, l'identification et le criblage.

Dans le service de sous-clonage, 4 μg d'ADN plasmidique en poudre sèche, de bactéries glycérol ou de bactéries de ponction contenant des plasmides, des résultats de séquençage (format ab1) et des documents de vérification de la digestion enzymatique ayant réussi l'inspection QC seront fournis. Generalbiosystems fournira aux clients des services de sous-clonage précis et rapides.