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Comment faire face aux problèmes rencontrés lors de la synthèse des gènes?

Temps de mise à jour : 2020-12-23

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Comment faire face aux problèmes rencontrés lors de la synthèse des gènes?
Question: Dans quelles circonstances dois-je effectuer une synthèse complète des gènes ?
Réponse: La synthèse de gènes entiers peut être utilisée dans les situations suivantes
(1) Améliorer l'expression de gènes étrangers grâce à l'optimisation des codons.
(2) La séquence est connue, mais il est difficile d'obtenir des gènes à partir d'échantillons biologiques.
(3) Gènes avec des conditions d'expression difficiles et une abondance d'expression extrêmement faible.
(4) Divers gènes conçus artificiellement.
(5) Ribozymes conçus artificiellement.
(6) Une grande quantité d'ADNc pour puce à ADN.
(7) Diverses modifications artificielles des gènes.


Question: Combien de temps un gène entier peut-il être synthétisé?

Réponse: Il n'y a pas de limite de longueur en théorie. Cependant, en raison de facteurs tels que la technologie de clonage, la capacité du vecteur, etc., la longueur de la synthèse d'un gène complet ne dépasse généralement pas 10 kb. Nous pouvons terminer toute la synthèse du gène en dessous de 10 kb.


Question: Quels types de transporteurs gratuits Nupu Biotech peut-il fournir?

Réponse: Nous avons essentiellement des vecteurs commerciaux communs, tels que les vecteurs de la série pET, les vecteurs pEGFP, les vecteurs d'empaquetage de lentivirus, les vecteurs siRNA, etc. Nous pouvons également accepter les vecteurs fournis par les clients pour le clonage.


Question: L'optimisation des codons est-elle nécessaire?

Réponse: Pour les gènes utilisés pour l'expression des protéines, c'est nécessaire dans la plupart des cas. Par exemple, les gènes des eucaryotes doivent être exprimés chez les procaryotes. Étant donné que la préférence des codons des eucaryotes est très différente de celle des procaryotes, l'optimisation des codons des gènes améliorera considérablement l'efficacité d'expression. Certains clients ont signalé que la séquence optimisée était 3 à 5 fois plus élevée que la séquence d'origine.


Question: Combien de temps faut-il pour la synthèse complète des gènes?

Réponse: Pour les fragments inférieurs à 500 pb, le cycle de synthèse moyen est de 10 jours ouvrables. Pour les fragments de 500 à 1000 pb, le cycle de synthèse moyen est de 12 jours ouvrables. Pour chaque 1 Ko supplémentaire de fragments plus longs, le temps moyen requis augmente de 7 jours ouvrables.


Question: Et si j'ai besoin de sous-cloner dans d'autres vecteurs?

Réponse: Generalbiosystems ——Gene Synthesis Service Company peut vous aider à connecter gratuitement le gène entier synthétisé au support qui vous intéresse (vous devez fournir les informations sur le transporteur et le transporteur correspondants lors de la commande). Nous pouvons également fournir gratuitement une variété de vecteurs d'expression eucaryotes et procaryotes. Vous êtes invités à contacter notre service clientèle pour toute demande de renseignements.


Question: Quelles sont les étapes de la synthèse génique totale?

Réponse: La synthèse complète des gènes comprend: la conception et la synthèse d'amorces; Séquence d'épissage PCR; clonage en vecteur; vérification du séquençage.


Question: Dois-je choisir la synthèse de gène entier ou le clonage par PCR?

Réponse: Le clonage par PCR doit extraire l'ARN des tissus ou des cellules exprimant des gènes, la transcription inverse en ADNc, puis amplifier le gène cible à partir de l'ADNc. Le gène cible obtenu n'est pas facile à modifier la séquence, et tout mutant doit être obtenu par des étapes de mutation ultérieures.

L'optimisation des codons est encore plus impossible. Une autre limitation majeure du clonage par PCR est qu'il est difficile de cloner avec succès des gènes spéciaux tels que des gènes avec une faible abondance d'expression et des gènes avec un temps d'expression extrêmement court. En comparaison, la synthèse de gènes entiers est une méthode de clonage plus flexible, plus efficace et moins chère.