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Plusieurs stratégies efficaces pour l'expression des protéines

Temps de mise à jour : 2020-10-28

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Plusieurs stratégies efficaces pour l'expression des protéines
Le forum est trempé tous les jours et l'expérience se fait tous les jours, mais la protéine n'est toujours pas bien exprimée?

L'éditeur présente ici plusieurs stratégies efficaces, très efficaces pour obtenir une protéine recombinante fonctionnelle à haut rendement!

Le système d'expression mammifère surmonte le problème de la modification post-traductionnelle de l'expression des protéines dans le système d'expression procaryote.

La protéine exprimée a les fonctions de repliement et de modification, est hautement humanisée et peut être utilisée pour l'analyse structurelle et fonctionnelle.

Il existe généralement deux manières d'exprimer des protéines dans les cellules de mammifères: l'expression transitoire et la transfection stable (construction de lignées cellulaires stables).


L'utilisation d'une transfection cellulaire stable pour transfecter des gènes étrangers dans des chromosomes cellulaires peut produire la protéine cible de manière stable pendant une longue période. Cependant, le coût de l'expérience est élevé, le cycle est long et l'opération est difficile.

L'expression transitoire de la protéine signifie que le gène étranger existe sur le vecteur libre et n'a pas été transfecté dans les chromosomes de la cellule.

Une fois le plasmide construit, la protéine cible peut être obtenue par les étapes de récupération cellulaire, de transfection, de culture cellulaire et de purification de protéine.

L'opération est simple, le coût de l'expérience est faible et le cycle est court. Il convient le mieux à la préparation rapide et à petite échelle d'une certaine quantité de protéine recombinante et d'anticorps recombinants.


Venez voir comment améliorer l'expression transitoire des protéines!

Stratégie 1: Optimiser la séquence de codage

Selon l'application spécifique en aval, concevez la meilleure séquence codante et sélectionnez le vecteur d'expression le plus approprié. Avant de commencer l'expression de protéines, l'utilisation d'algorithmes d'optimisation de codons (tels que OptimumGene ™ ou GenSmart Codon Optimization) et d'un guide de sélection de vecteur d'expression peut vous faire gagner du temps, des efforts et des dépenses.
Savez-vous? GeneralBiosystems peut fournir des services intégrés allant de la synthèse des gènes (optimisation des codons libres) à l'expression et à la purification des protéines !

Stratégie 2: améliorer la solubilité des protéines

Une faible solubilité des protéines est un facteur clé qui entraîne un faible rendement d'expression des protéines recombinantes. Nous suggérons d'ajuster certains paramètres de condition d'expression couramment utilisés pour améliorer la solubilité des protéines.

Température:

Pour HEK293 et d'autres lignées cellulaires de mammifères, il est recommandé de cultiver les cellules dans un incubateur à 37 ° C, 5% de CO2. Certaines études ont montré que l'incubation de la température de 37 ° C à 33 ° C 24 heures après la transfection peut augmenter l'expression protéique des cellules HEK293.

Bien que les milieux de base fournis par différents fournisseurs soient très similaires, des différences mineures entre eux peuvent affecter la croissance de lignées cellulaires d'expression spécifiques.

Assurez-vous d'optimiser la concentration, le pH, le type et même le nombre de lots ou de lots de composants externes, tels que le sérum ajouté au milieu de culture.


Additifs moyens:

Dans certains cas, nous recommandons d'ajouter des réactifs spécifiques au milieu pour augmenter l'expression des protéines. Par exemple, l'ajout d'inhibiteurs d'histone désacétylase peut dépolymériser la chromatine et augmenter l'activité transcriptionnelle des gènes intégrés. Alternativement, l'ajout de facteurs de croissance spécifiques au milieu peut aider à augmenter la production de protéines.

Stratégie 3: utiliser un partenaire de fusion

Les étiquettes protéiques sont de courtes séquences peptidiques insérées dans des protéines recombinantes et peuvent être utilisées pour augmenter l'expression des protéines. Il est généralement éliminé par digestion enzymatique ou par réactifs chimiques à la fin de l'expression des protéines.

Le choix de la bonne étiquette pour un système d'expression particulier dépend de nombreux facteurs. Si l'objectif est d'obtenir des rendements extrêmement élevés, vous devez utiliser des marqueurs solubilisants.

Par exemple, GST a un fort signal d'initiation de la traduction et peut favoriser une expression de haut niveau. Cependant, si un niveau d'expression inférieur est requis, il est recommandé d'utiliser des balises épitopiques plus strictes, telles que les balises His.


Stratégie 4: Optimiser la méthode de purification

Concevez différentes méthodes de purification en fonction des applications en aval et des exigences de pureté.

Si le niveau d'expression de la protéine est élevé, la méthode de purification par affinité en une étape peut être utilisée pour obtenir une quantité et une pureté suffisantes de protéine pour répondre à diverses applications en aval.

Si une purification supplémentaire est nécessaire, la chromatographie d'exclusion de taille (SEC) peut généralement être effectuée après la purification par affinité. Pour une purification supplémentaire, la chromatographie par échange d'ions (échange d'ions, IEX) peut être utilisée.