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Quel est le processus d'expression des protéines recombinantes?

Temps de mise à jour : 2020-10-22

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Quel est le processus d'expression des protéines recombinantes?

La technologie d' expression des protéines recombinantes peut être utilisée pour analyser la régulation des gènes et étudier la structure et la fonction des protéines. Qu'il s'agisse de recherche fonctionnelle in vivo ou de production à grande échelle pour la recherche structurale, ainsi que de développement de médicaments dans le domaine de la biothérapie, la technologie d'expression des protéines est nécessaire.


Voici quelques points de connaissance de l'expression des protéines résumés par General Biosystems .

Voie générale de synthèse des protéines :

ADN -> ARNm -> protéine

Le processus de fonctionnement réel est:

1. Cloner ou synthétiser le gène cible

2. Construction de vecteurs

3. Expression et purification des protéines

4. Expression de masse et purification de protéines (ou aucune)


Cloner ou synthétiser le gène cible

Un vecteur d'expression protéique typique comprend au moins 4 éléments principaux:


• Boîte d’expression du gène cible (y compris le promoteur et la terminaison du gène ou le signal poly (A))

• L'origine de la réplication des bactéries (ori)

• Boîte de sélection des antibiotiques pour un hôte spécifique (comme l'hygromycine B, l'acide mycophénolique, la puromycine, la blasticidine S, etc.)

• Boîte de sélection des antibiotiques pour Escherichia coli (comme l'ampicilline, la blasticidine S, la carbénicilline, la résistance aux antibiotiques sélectifs à la zéocine, etc.)


Les autres composants comprennent:

• Site de clonage multiple (MCS) (ie lieur multi-restriction)

• Balises d'épitope

• Signal de sécrétion

• Site de reconnaissance de protéase

• Site d’insertion interne du ribosome (IRES)


Plusieurs cas courants d'expression de protéines

L'expression des protéines est le contenu principal de nombreux sujets expérimentaux. En raison des différents domaines de recherche et des différents vecteurs d'expression, les caractéristiques de la protéine que chaque personne souhaite exprimer sont extrêmement différentes.

Surtout certains petits partenaires travaillent sur le sujet pour la première fois. Comment exprimer la protéine et comment organiser les procédures expérimentales est encore plus déroutant.

Voici les schémas d'expression de protéines recombinantes les plus couramment utilisés selon différents vecteurs d'expression.

Comparez chaque cas d'expression de protéine des étapes expérimentales, le temps nécessaire et les objectifs à atteindre à chaque étape. Vous pouvez comparer votre propre contenu expérimental et espérer qu'il vous aidera.

 

Expression protéique couramment utilisée (y compris la préparation de lignées cellulaires):

• Développement de lignées cellulaires stables CHO

• Développement de lignée cellulaire stable HEK293

• Expression des protéines procaryotes

• Expression transitoire dans les cellules de mammifères

• Expression des protéines de levure

• Expression des protéines des baculovirus et des cellules d'insectes

Comparaison de différentes expressions de protéines

Le temps de réalisation du plan d'expérience ci-dessus est le temps de processus de travail d'un laboratoire plus mature, et vous pouvez le saisir de manière flexible en fonction de votre propre arrangement d'expérience.

Pour atteindre l'objectif, vous devez également faire des ajouts et des réductions appropriés en fonction de vos propres exigences en matière de sujet.

Si vous avez un sujet de recherche à relativement grande échelle et que l'expression des protéines n'est qu'une partie du sujet, General Biosystems peut fournir les divers services d'expression de protéines ci-dessus.  

Les avantages techniques de General Biosystems :

Vecteur d'expression très efficace

Culture cellulaire haute densité

Formule de milieu de culture avec droits de propriété indépendants

> 6000 expériences d'expression, de purification et de production de protéines

Technologie de renaturation des protéines corporelles d'inclusion et expression soluble