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Précautions pour la purification des protéines dans les cellules de mammifères

Temps de mise à jour : 2020-12-07

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Précautions pour la purification des protéines dans les cellules de mammifères
Cet article présente principalement les précautions pour la purification p rotein dans les cellules de mammifères .

Les principales propriétés de la protéine recombinante produite par les cellules animales générales peuvent être résumées comme suit: sécrétée dans le milieu de culture sous une forme naturelle et correctement repliée; modification post-traductionnelle correcte; aucune restriction sur le poids moléculaire de la protéine recombinante; les cellules de mammifères ne produisent pas d'endotoxine; faible concentration de produit; culture La teneur en protéines de la base peut être élevée; le processus de production peut contenir des virus, de l'ADN ou des protéines cellulaires, qui doivent être éliminés par des processus en aval.

mammalian cells


Les stratégies de purification des protéines dérivées de cellules de mammifères doivent non seulement pouvoir être reproductibles, répondre à certaines exigences de pureté et formes spécifiques, mais également éliminer les contaminants potentiellement nocifs qui peuvent provenir du processus de préparation, y compris les protéines animales, les virus et les virus dans les cellules ou les cultures. . ADN, ou antibiotiques pour la culture cellulaire, etc. Les points suivants nécessitent une attention particulière:


① Exigences d'hygiène, toutes les étapes de séparation doivent pouvoir fonctionner dans des conditions calmes et aucune charge biologique ou endotoxine ne doit être introduite.

Les matières premières purifiées doivent être stériles et la teneur en endotoxines doit être très faible et aucun antibiotique ne doit être utilisé.


② Les matériaux de traitement qui ne peuvent pas être stérilisés à la vapeur (tels que les supports chromatographiques) doivent être nettoyés et dépyrogénés par d'autres méthodes efficaces.

Les méthodes typiques comprennent le traitement avec des solutions désinfectantes telles que 0,2 ~ 0,5 mole / L de NaOH ou de l'éthanol acide (60% d'éthanol / 0,5 mol / L d'acide acétique) et un mélange d'hydroxyde de sodium / éthanol (tel que 50% d'éthanol / 0,2 mole / L de NaOH) ). Il peut être utilisé et le temps de traitement est généralement de 4 à 24 heures à température ambiante.


③ L'intégrité du processus garantit que le produit peut passer directement d'une étape d'opération à l'autre, sans opérations supplémentaires au milieu, ce qui est idéal.


④ Indépendamment de la force mécanique ou des conditions de culture défavorables, les cellules de mammifères sont beaucoup plus faibles que les cellules microbiennes, il faut donc veiller à garder les cellules intactes.

Il est nécessaire de contrôler soigneusement les conditions de culture et de séparation cellulaire pour éviter la contamination du produit par des protéines intracellulaires libérées en raison de la lyse cellulaire.


Les schémas de purification typiques pour les protéines recombinantes ou les anticorps monoclonaux produits par la culture de cellules de mammifères ou d'animaux transgéniques comprennent généralement une séparation préliminaire (filtration ou centrifugation, concentration d'ultrafiltration), chromatographie d'échange d'ions (ou d'affinité), filtration sur gel, etc. Un produit d'une pureté de 99 % à 100% est obtenu.