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Vue d'ensemble de la technologie de clonage par PCR

Temps de mise à jour : 2020-08-12

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Vue d'ensemble de la technologie de clonage par PCR
La technologie de clonage par PCR (réaction en chaîne par polymérase) fait référence à la réaction en chaîne par polymérase, également connue sous le nom de technologie d'amplification d'ADN in vitro.

Méthodes traditionnelles d'amplification de l'ADN:

La méthode traditionnelle d'amplification de l'ADN est le clonage moléculaire, qui nécessite la construction d'un vecto r contenant le gène cible à introduire dans les cellules pour l'amplification, et des sondes pour le criblage, y compris les techniques de digestion, de ligature, de transformation, de culture et d'hybridation de l'ADN. Bien qu'il n'y ait pas de difficultés techniques, l'opération est compliquée, le cycle est long et il n'est pas propice à la vulgarisation.

Avantages de la technologie de clonage PCR:

La technologie de clonage par PCR a été proposée pour la première fois par Mullis aux États-Unis en 1983, et la réaction en chaîne par polymérase, la méthode simple d'amplification de l'ADN, a été inventée en 1985, ce qui a signifié la véritable naissance de la technologie de clonage par PCR.

Depuis 2013, le clonage par PCR est devenu la technologie de troisième génération. La technologie de clonage par PCR peut amplifier une petite quantité de fragments d'ADN cible des millions de fois.


La technologie de clonage par PCR est largement utilisée dans les domaines de la microbiologie, de la médecine, de l'agriculture et de l'archéologie en raison de sa sensibilité élevée, de sa forte spécificité, de son rendement élevé, de sa bonne reproductibilité, de sa rapidité et de sa simplicité.

Il a été largement popularisé dans divers laboratoires. La technologie de clonage moléculaire traditionnelle est simplifiée, de sorte que les chercheurs peuvent plus facilement analyser et identifier le gène cible.


Principes de base de la technologie de clonage par PCR:

Le clonage par PCR est basé sur l'utilisation d'ADN qui se dénature et devient simple brin à une température élevée de 95 ° C in vitro.

Aux basses températures (généralement autour de 60 ° C), les amorces et les monocaténaires sont combinés selon le principe de l'appariement complémentaire des bases, puis la température est ajustée à l'ADN polymérase optimale.

A la température de réaction (environ 72 ° C), l'ADN polymérase synthétise la chaîne complémentaire suivant la direction de l'acide phosphorique en sucre à cinq carbones (5'-3 ').

La machine PCR basée sur la polymérase est en fait un dispositif de contrôle de la température, qui peut bien contrôler la température de dénaturation, la température de renaturation et la température d'élongation.


En tant que méthode de base de la biologie moléculaire, la technologie de clonage par PCR est largement utilisée dans les applications de biologie moléculaire telles que le clonage de gènes, la recombinaison de gènes, l'analyse de séquences d'ADN et la détection quantitative des gènes. En même temps, la technologie de clonage par PCR est également utilisée dans la détection médicale des gènes liés aux tumeurs, le diagnostic précoce des maladies génétiques, etc., fournissant des moyens techniques efficaces pour l'identification médicale et l'analyse des risques.

La technologie de clonage brevetée de Generalbiosystems peut aider les clients à cloner le gène cible à n'importe quelle position désignée du vecteur souhaité sans se fier aux sites de restriction vectorielle, en satisfaisant les diverses idées de clonage des clients et en économisant beaucoup de temps par rapport au temps de clonage ordinaire.

Pour le clonage de différents fragments de gène du même vecteur, nous pouvons également compléter efficacement des services de sous-clonage à haut débit.