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Comment obtenir le gène cible

Temps de mise à jour : 2020-09-02

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Comment obtenir le gène cible
Les procédures opérationnelles de base du génie génétique comprennent principalement quatre étapes: acquisition du gène cible, construction du vecteur d'expression génique, introduction du gène cible dans les cellules receveuses, détection et identification du gène cible.
Ce qui suit introduit d'abord l'acquisition du gène cible.


1. Déterminez l'objet de l'expérience et le but de l'expérience.

Par exemple, si nous voulons préparer des légumes génétiquement modifiés, nous devons choisir un légume. La tomate, en tant que légume le plus productif au monde, fait l'objet de nombreuses recherches connexes.

La méthode de modification génétique est également mature. Tout le monde adore le manger. Il peut être utilisé comme légume et fruit. Il est très pratique de cultiver à la maison et c'est un très bon choix.


2. Trouvez le gène cible


Une fois que nous avons déterminé le trait que nous voulons changer, nous devons trouver le gène qui contrôle ce trait.
Recherchez les fichiers de séquences de gènes pertinents sur Internet.

3. Clonage de gènes


Puisque nous devons amplifier une séquence d'ADNc à partir d'espèces de tomates, cela signifie que nous devons extraire l'ARN de tomate, utiliser la transcription inverse pour développer l'ADNc, puis utiliser l'ADN polymérase pour développer le fragment de gène double brin.

Les trois principaux réactifs ici sont la transcriptase inverse, l'ADN polymérase (communément appelée enzyme PCR) et le réactif Trizol pour l'extraction de l'ARN. L'expansion de l'enzyme PCR de fragments de 2KB avec l'enzyme Taq est suffisante.


Ensuite, nous pouvons mentionner l'ARN! L'ARN extrait est placé au congélateur.

Vous souvenez-vous encore du fichier de séquence de gène que nous avons téléchargé plus tôt? Nous devons maintenant installer un logiciel pour l'ouvrir, concevoir des amorces pour l'amplification génique et construire des vecteurs.


Ensuite, sélectionnez la première séquence de brin positif de 30 bases et la dernière séquence de brin négatif de 30 bases, et utilisez-les comme séquences d'amorces, puis trouvez une société biologique sur Internet qui peut synthétiser des amorces, telles que Generalbiosystems .

Envoyez-leur la séquence et les amorces vous seront envoyées dans deux jours. Les deux amorces coûtent probablement moins de 7 $. Suivez ensuite les instructions de la transcriptase inverse pour effectuer la transcription inverse avec une machine PCR, puis utilisez le produit de transcription inverse comme modèle pour amplifier le gène avec la machine PCR selon les instructions de l'enzyme PCR.


Ensuite, dépensez 10 $ pour acheter un marqueur d'ADN 5K et de la poudre d'agar pour faire fonctionner le gel, puis envoyez un colorant (tel que l'EB) qui est ajouté au gel pour colorer l'ADN, et exécutez un gel pour confirmer qu'il y a un 2K bande.

À ce stade, le clonage du gène est terminé. Si vous avez de l'argent disponible, vous pouvez envoyer ce produit PCR à la société qui commande les amorces pour tester la séquence et la confirmer.