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Application et développement du clonage PCR

Temps de mise à jour : 2020-08-11

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Application et développement du clonage PCR

La technologie de réaction en chaîne de polymérase ( PCR ) présente de nombreux avantages tels qu'une forte spécificité, une sensibilité élevée, une rapidité et une simplicité, et peut amplifier le gène cible souhaité à des dizaines de milliers de fois en peu de temps.

Aujourd'hui, avec le développement rapide des sciences de la vie, la technologie de clonage par PCR est devenue une technologie de routine en biologie moléculaire. La technologie de clonage par PCR a été largement utilisée dans la recherche biologique, la médecine, la détection de virus, l'industrie alimentaire, etc.


Technologie PCR appliquée au clonage de gènes

L'utilisation de la technologie PCR pour le clonage et le sous-clonage de gènes a joué un rôle majeur dans la recherche en biologie cellulaire.


La technologie de clonage par PCR peut amplifier une seule copie d'un gène plusieurs millions de fois, et les fragments d'ADN spécifiques générés peuvent être des microgrammes (pg), en omettant la digestion de l'ADN nécessaire pour cloner un fragment de gène spécifique à partir de l'ADN génomique.

Le processus expérimental fastidieux de ligature à l'ADN du vecteur, de transformation, de création d'une bibliothèque d'ADN, de criblage et de détermination de gènes et de sous-clonage.


Technologie de clonage par PCR appliquée à la recombinaison d'ADN

Dans la recherche en biologie moléculaire, des gènes spécifiques ou des fragments d'ADN provenant de différentes sources peuvent être insérés dans des virus, des plasmides ou d'autres vecteurs in vitro par la technologie de clonage par PCR pour construire des molécules d'ADN recombinant, puis les introduire dans des cellules receveuses pour l'amplification et la reproduction.


Après criblage, les cellules transformantes contenant le gène cible sont amplifiées et extraites pour obtenir une grande quantité d'ADN.

La technologie de l'ADN recombinant peut être appliquée à la recherche dans le projet du génome humain, à l'expression de protéines précieuses, au diagnostic et au traitement des gènes, aux plantes et animaux génétiquement modifiés et à d'autres domaines.


Application de la technologie de clonage par PCR à la détection quantitative des gènes


La technologie de clonage par PCR peut surveiller quantitativement le nombre de copies du gène cible dans l'échantillon et placer le gène cible et une seule copie du gène de référence dans le même tube à essai pour le clonage par PCR.


Observez l'intensité de la bande après la séparation par électrophorèse, ou marquez un radionucléide à l'extrémité 5 'de l'amorce, et détectez le nombre de copies du gène en détectant l'intensité de radioactivité des deux bandes.

L'utilisation de la technologie de clonage par PCR peut également compléter la détection quantitative de l'ARNm.


Tout d'abord, faites avancer l'ARN total, ajoutez des amorces complémentaires aux régions 3 et 7 de l'ARNm, synthétisez l'ADNc sous l'action de la transcriptase inverse, puis reportez-vous aux étapes de détection quantitative de l'ADN.



L'application de la technologie de clonage par PCR peut quantifier avec précision le tuRNA, et même 1TIRNA qui n'a pas pu être trouvé par l'hybridation Northern blot peut être détecté.


Le changement de gènes endogènes et l'invasion de gènes étrangers constituent également une grande menace pour les maladies humaines. Cependant, que la cause de la maladie soit ou non causée par des changements génétiques, tant que l'agent pathogène existe, l'acide nucléique peut être trouvé.


En conséquence, la technologie de clonage par PCR et ses technologies associées ont été développées jusqu'à présent, et elles peuvent être pleinement appliquées à la détection et au diagnostic d'agents pathogènes de maladies infectieuses, à la détection des gènes liés aux tumeurs, au diagnostic précoce des maladies génétiques, à la transplantation de moelle osseuse HLA- D appariement de sites et analyse chimique et médecine légale Recherche dans d'autres domaines.


Généralbiosystèmes '   La technologie de clonage brevetée peut aider les clients à cloner le gène cible à n'importe quelle position désignée du vecteur souhaité sans se fier au site de restriction du vecteur, en satisfaisant les diverses idées de clonage des clients et en économisant considérablement par rapport au temps de clonage ordinaire.

Pour le même vecteur de clonage de différents fragments de gènes, nous pouvons également compléter efficacement des services de sous-clonage à haut débit.